Does leukocyte-platelet-rich fibrin (L-PRF) cause long term acceleration in the rate of canine retraction? A split-mouth, two-arm parallel group, randomized control trial

ABSTRACT Objective: The present study was conducted to investigate the effects of leukocyte-platelet-rich fibrin (L-PRF) on the rate of maxillary canine retraction for a period of 5 months. Methods: A split-mouth study was conducted on 16 subjects (9 males and 7 females; age range 17-25 years; mean age, 21.85±2.45 years) who required therapeutic extraction of bilateral maxillary first premolars. After the initial leveling and alignment, L-PRF plugs were placed in a randomly selected extraction socket (Experimental Group), and the other side served as a control (Control Group). Canine retraction was carried out by the activation of nickel-titanium (NiTi) closed-coil springs delivering 150 g of force. The rates of canine movement, canine rotation, tipping, root resorption, and molar movement were assessed at monthly intervals for five months (T0-T5). Pain, swelling and discomfort accompanying the procedure were assessed using a Likert scale. Results: The study revealed a significant increase in the rate of canine movement on the experimental side in the first two months, and significant molar anchorage loss was observed only in the first month for control side. There were no statistically significant differences between the groups regarding canine rotation, tipping, probing depth, root resorption, and pain perception. Conclusions: The use of L-PRF plugs in extraction sockets considerably enhanced the rate of canine movement only in the first two months, and long-term efficacy was not observed in this study.

RESUMO Objetivo: O presente estudo foi realizado para investigar os efeitos da fibrina rica em leucócitos e plaquetas (L-PRF) na taxa de retração do canino superior, durante um período de cinco meses. Métodos: Um estudo de boca dividida foi realizado em 16 indivíduos (9 homens e 7 mulheres; faixa etária de 17 a 25 anos; idade média de 21,85 ± 2,45 anos) que precisavam de extração terapêutica dos primeiros pré-molares superiores de ambos os lados. Após o nivelamento e o alinhamento iniciais, os plugs de L-PRF foram colocados em um alvéolo pós-extração, selecionado aleatoriamente (Grupo Experimental), e o outro lado serviu como controle (Grupo Controle). A retração do canino foi realizada pela ativação de molas fechadas de níquel-titânio (NiTi) com 150 g de força. As taxas de movimentação do canino, rotação, inclinação e reabsorção radicular do canino e movimentação do molar foram avaliadas em intervalos mensais durante cinco meses (T0-T5). A dor, o inchaço e o desconforto após o procedimento foram avaliados por meio de uma escala de Likert. Resultados: O estudo revelou um aumento significativo na taxa de movimentação do canino no lado experimental nos dois primeiros meses, e uma perda significativa de ancoragem do molar foi observada apenas no primeiro mês no lado controle. Não houve diferenças estatisticamente significativas entre os grupos, com relação à percepção da dor e rotação, inclinação, profundidade de sondagem e reabsorção radicular do canino. Conclusões: O uso de plugs de L-PRF em alvéolos pós-extração aumentou consideravelmente a taxa de movimentação do canino apenas nos dois primeiros meses, não sendo observada uma eficácia em longo prazo.

Optimized broad-range real-time PCR-based method for bacterial screening of platelet concentrates / Otimização de um método baseado em PCR em tempo real para rastreamento de bactérias em concentrados de plaquetas

Abstract Bacterial contamination of blood components remains a major challenge in transfusion medicine, particularly, platelet concentrates (PCs) due to the storage conditions that support bacterial proliferation. In this study, we develop a rapid, sensitive and specific real-time PCR protocol for bacterial screening of PCs. An internally controlled real-time PCR-based method was optimized and validated with our proprietary 16S Universal PCR Master Mix (IBMP/Fiocruz), which targets a conserved region of the bacterial 16S rRNA gene. Nonspecific background DNA was completely eliminated by treating the PCR Master Mix with ethidium monoazide (EMA). A lower limit of detection was observed for 10 genome equivalents with an observed Ct value of 34±1.07 in calibration curve generated with 10-fold serial dilutions of E. coli DNA. The turnaround time for processing, including microbial DNA purification, was approximately 4 hours. The developed method showed a high sensitivity with no non-specific amplification and a lower time-to-detection than traditional microbiological methods, demonstrating it to be an efficient means of screening pre-transfusion PCs.

Resumo A contaminação bacteriana dos componentes sanguíneos é um grande desafio na medicina transfusional, principalmente nos concentrados de plaquetas (PCs) devido às condições de armazenamento que favorecem a proliferação bacteriana. Neste estudo, desenvolvemos um protocolo de PCR em tempo real rápido, sensível e específico para a triagem bacteriana de PCs. Um método baseado em PCR em tempo real, controlado internamente, foi otimizado e validado com um Master Mix Universal PCR 16S (IBMP / Fiocruz), que detecta uma região conservada do gene 16S rRNA bacteriano. O background de DNA não específico foi completamente eliminado tratando a PCR Master Mix com monoazida de etídio (EMA). O limite de detecção inferior observado foi de 10 cópias equivalentes do genoma com um valor de Ct 34 ± 1,07, a curva de calibração foi gerada com diluições seriada de 10 vezes do DNA de E. coli. O tempo de processamento, incluindo a purificação microbiana do DNA, foi de aproximadamente 4 horas. O método desenvolvido mostrou alta sensibilidade sem amplificação inespecífica e menor tempo de detecção do que os métodos microbiológicos tradicionais, demonstrando ser um meio eficiente de triagem de PCs pré-transfusionais.

Determinación de la viabilidad de los concentrados plaquetarios obtenidos de capa leucocitaria (buffy coat) durante siete días de almacenamiento / Monitoring of the Viability of Platelet Concentrates Obtained from Buffy Coat during Seven Days of Storage / Determinação da viabilidade de concentrados de plaquetas obtidos de camada leucocitária (buffy coat) durante sete dias de armazenamento

Introducción: los concentrados plaquetarios (CPG) son hemocomponentes lábiles afectados por varios factores, desde el método de obtención hasta las condiciones de almacenamiento, que provocan una paulatina pérdida de funcionalidad, por lo que es necesario evaluar parámetros de calidad que garanticen la viabilidad de las plaquetas durante los días de almacenamiento, con el propósito de monitorear el mantenimiento de las características funcionales de las plaquetas. Materiales y métodos: estudio descriptivo transversal, con un tamaño muestral de 64 cpq, evaluados a los 3, 5 y 7 días de almacenamiento. Los parámetros monitoreados fueron físicos, de almacenamiento y porcentaje de la activación plaquetaria mediante la medición de P-selectina (cd62) por citometría de flujo. Se aplicó el estadístico de chi cuadrado, Anova de un factor, Kruskall-Wallis y correlación de Pearson. Resultados: existen diferencias significativas al séptimo día con relación al tercer y quinto día de almacenamiento, especialmente en el parámetro de formación de remolino plaquetario o swirling (p < 0.005) y agregados plaquetarios (p = 0.001). La activación plaquetaria aumentó significativamente (p = 0.001) desde el quinto día. Conclusiones: la viabilidad de los cpq difiere con los días de almacenamiento, por lo que es necesario evaluar pH, formación de remo-linos y agregados a todos los cpq antes de ser transfundidos como indicativos de activación plaquetaria y disminución de su funcionalidad

Introduction: Platelet concentrates (cpq) are labile blood components affected by several factors from the method of production to storage conditions that cause a gradual loss of functionality. For this reason, it is necessary to evaluate the platelet quality parameters that guarantee the viability during the storage days, with the purpose of monitoring the maintenance of the functional characteristics of the platelets. Materials and methods: This cross-sectional descriptive study had a sample size of 64 platelet concen-trates, evaluated at 3, 5, and 7 days of storage. The monitored parameters were the physical storage parameters and percentage of platelet activation by measuring P-selectin (cd62) via flow cytometry. The chi-square statistic, one-way Anova, Kruskal­Wallis test, and Pearson correlation were applied. Results: Significant differences were observed on the 7th day in relation to the 3rd and 5th day of storage, espe-cially in the swirling parameter (p < 0.005) and platelet aggregates (p = 0.001). The platelet activation increased significantly (p = 0.001) on the 5th day. Conclusions: Based on the findings of this study, the viability of the platelet concentrates differs with the days of storage. For this reason, it is necessary to evaluate the swirling, pH, and aggregates to all platelet concentrates before being transfused as an indication of platelet activation and decreased functionality

Introdução: os concentrados de plaquetas (cpq) são hemocomponentes lábeis afetados por diversos fato-res, desde o método de obtenção até as condições de armazenamento que ocasionam uma perda grada-tiva de funcionalidade, sendo necessário avaliar os parâmetros de qualidade que garantem a viabilidade das plaquetas ao longo dos dias de armazenamento, a fim de monitorar a manutenção das características funcionais das plaquetas. Materiais e métodos: estudo descritivo transversal, com tamanho de amostra de 64 cpq, avaliados aos três, cinco e sete dias de armazenamento. Os parâmetros monitorados foram físicos, de armazenamento e porcentagem de ativação plaquetária pela dosagem de P-selectin (cd62) por citometria de fluxo. Os testes estatísticos aplicados incluíram o teste qui-quadrado, anovade um fator, teste de Kruskall-Wallis e correlação de Pearson. Resultados: há diferenças significativas no sétimo dia em relação ao terceiro e quinto dia de armazenamento, principalmente no parâmetro formação de rede-moinhos ou swirling de plaquetas (p < 0.005) e agregados plaquetários (p = 0.001). A ativação plaquetária aumentou significativamente (p = 0.001) a partir do quinto dia. Conclusões: a viabilidade dos concentra-dos de plaquetas difere com os dias de armazenamento, por isso é necessário avaliar o pH, a formação de redemoinhos e agregados a todos os concentrados de plaquetas antes de serem transfundidos como indicativo de ativação plaquetária e diminuição de sua funcionalidade

Aplicación de la terapia regenerativa en la enfermedad arterial periférica y el pie diabético isquémico / Use of regenerative therapy in the peripheral arterial disease and the ischemic diabetic foot

Introducción: El pie diabético isquémico y la enfermedad arterial periférica, son dos enfermedades que ocasionan dolor por isquemia crítica y ponen en peligro la viabilidad de las extremidades inferiores. Objetivo: Demostrar la efectividad de la terapia regenerativa con plasma rico en plaquetas en pacientes con las enfermedades citadas. Métodos: Estudio longitudinal, prospectivo y aleatorizado realizado en el Servicio de Angiología del Hospital: Julio Trigo López, entre enero 2016-diciembre 2017. Se incluyeron 26 pacientes en dos grupos de estudios, 10 pacientes no diabéticos con claudicación intermitente y 16 pacientes con lesiones isquémicas en el pie del diabético. Se aplicó plasma rico en plaquetas por vía intramuscular en la pierna afectada, en el primer grupo y de forma intra- y perilesional en el pie del diabético isquémico. Resultados: Se obtuvo alivio del dolor y mejoría en más del 70 por ciento de los pacientes en la distancia de claudicación por encima o cerca de los 200 metros. En los pacientes con pie diabético isquémico, alivio del dolor y cierre de las lesiones isquémicas en el 81,3 por ciento, solo 3 pacientes requirieron amputaciones mayores de los miembros inferiores. Conclusiones: La terapia regenerativa resulta efectiva en el salvataje de las extremidades inferiores en los pacientes estudiados, asociada a los procedimientos convencionales empleados en la cirugía revascularizadora; disminuye la amputación mayor de miembros inferiores y es una posibilidad terapéutica más en manos de especialistas entrenados, por su impacto social y en la calidad de vida de pacientes y familiares(AU)

Introduction: Ischemic diabetic foot and peripheral arterial disease are two conditions that cause pain and put in danger the functionality of lower limbs. Objective: To demonstrate the effectiveness of regenerative therapy with platelet-rich plasma in patients with the above mentioned diseases. Methods: Longitudinal, prospective and randomized study that was conducted in the Angiology Service of Julio Trigo López Hospital, from January 2016 to December 2017. There were 26 patients included in 2 groups: 10 non-diabetic patients with intermittent claudication and 16 patients with ischemic lesions in the diabetic foot. Platelet-rich plasma was used instramuscularly in an affected legs of the first group, and intraperilesional and perilesional in the diabetic foot. Results: There was pain relief and improvement in more than 70 percent of patients in the claudication distance higher or near to 200 meters. In the patients presenting ischemic diabetic foot, pain relief and closing of ischemic lesions in the 81,3 percent , just 3 patients required major amputations of lower limbs. Conclusions: Regenerative therapy results effective in the rescue of lower limbs in patients presenting peripheral arterial disease and ischemic diabetic foot. It also reduces major amputations of lower limbs and it is another therapeutic option in the hands of trained specialists due to its social impact and in the life quality of patients and their families(AU)

O uso do concentrado de plaquetas na oftalmologia: uma revisão de literatura / The use of platelet rich-plasma in Ophthalmology: a literature review

Resumo Esta revisão tem por objetivo elencar as condições oftalmológicas em que tem sido utilizado o concentrado de plaquetas (CP), assim como as suas propriedades bioquímicas e fisiológicas. O CP possui tanto o potencial anticatabólico, presente no soro autólogo, quanto substâncias com propriedades anabólicas, que em conjunto são responsáveis pelos seus benefícios no tratamento de doenças da superfície ocular. Atualmente há um lapso de ensaios clínicos neste tema, tanto na oftalmologia como em outras áreas médicas, existindo mais estudos e relatos sobre o uso de soro autólogo. Em oftalmologia, o CP tem sido usado no tratamento do olho seco sintomático, úlceras corneanas, queimaduras oculares dentre outras aplicações, sendo uma alternativa eficaz em diversas patologias oculares; portanto, é evidente a importância de mais estudos nesse tema, para comprovar a efetividade do produto.

Abstract The aim of this review is to list the ophthalmological conditions in which platelet concentrate (CP) has been used, as well as its biochemical and physiological properties. The CP has both anticatabolic potential, present in autologous serum, and substances with anabolic properties, which together are responsible for its benefits in the treatment of ocular surface diseases. There is currently a shortage of clinical trials in this area, both in ophthalmology and other medical areas, with more studies and reports on the use of autologous serum. In ophthalmology, CP has been used in the treatment of symptomatic dry eye, corneal ulcers and ocular burns, among other applications, being an effective alternative in several ocular pathologies; therefore, it's evident the importance of more studies in this topic to prove the efficiency of this product.

Optimized broad-range real-time PCR-based method for bacterial screening of platelet concentrates

Abstract Bacterial contamination of blood components remains a major challenge in transfusion medicine, particularly, platelet concentrates (PCs) due to the storage conditions that support bacterial proliferation. In this study, we develop a rapid, sensitive and specific real-time PCR protocol for bacterial screening of PCs. An internally controlled real-time PCR-based method was optimized and validated with our proprietary 16S Universal PCR Master Mix (IBMP/Fiocruz), which targets a conserved region of the bacterial 16S rRNA gene. Nonspecific background DNA was completely eliminated by treating the PCR Master Mix with ethidium monoazide (EMA). A lower limit of detection was observed for 10 genome equivalents with an observed Ct value of 34±1.07 in calibration curve generated with 10-fold serial dilutions of E. coli DNA. The turnaround time for processing, including microbial DNA purification, was approximately 4 hours. The developed method showed a high sensitivity with no non-specific amplification and a lower time-to-detection than traditional microbiological methods, demonstrating it to be an efficient means of screening pre-transfusion PCs.

Resumo A contaminação bacteriana dos componentes sanguíneos é um grande desafio na medicina transfusional, principalmente nos concentrados de plaquetas (PCs) devido às condições de armazenamento que favorecem a proliferação bacteriana. Neste estudo, desenvolvemos um protocolo de PCR em tempo real rápido, sensível e específico para a triagem bacteriana de PCs. Um método baseado em PCR em tempo real, controlado internamente, foi otimizado e validado com um Master Mix Universal PCR 16S (IBMP / Fiocruz), que detecta uma região conservada do gene 16S rRNA bacteriano. O background de DNA não específico foi completamente eliminado tratando a PCR Master Mix com monoazida de etídio (EMA). O limite de detecção inferior observado foi de 10 cópias equivalentes do genoma com um valor de Ct 34 ± 1,07, a curva de calibração foi gerada com diluições seriada de 10 vezes do DNA de E. coli. O tempo de processamento, incluindo a purificação microbiana do DNA, foi de aproximadamente 4 horas. O método desenvolvido mostrou alta sensibilidade sem amplificação inespecífica e menor tempo de detecção do que os métodos microbiológicos tradicionais, demonstrando ser um meio eficiente de triagem de PCs pré-transfusionais.

Padronização de técnica manual para obtenção de plasma rico em plaquetas de bovino / Standardization of manual technique for obtaining platelet-rich plasma in cattle

Para padronização de uma técnica manual para a obtenção de plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em bovinos com custo reduzido (método manual) e de boa qualidade (capacidade de concentrar plaquetas, alta concentração de fatores de crescimento e contaminação reduzida com leucócitos e eritrócitos), que poderá ser utilizado como um agente modulador da resposta imune de vacas com diferentes enfermidades, 450 ml de sangue total de nove vacas clinicamente saudáveis e com perfil hematológico normal foi coletado em bolsas de sangue CPDA-1 e processado dentro de quatro horas após a coleta. O sangue foi separado em alíquotas para avaliar 8 protocolos (P) de centrifugação dupla que variaram quanto a velocidade e o tempo de centrifugação. A contagem de plaquetas, eritrócitos e leucócitos na suspensão obtida (PRP) foi realizada pelo método manual em câmara de Neubauer: P5 (400g e 800g ambos durante 10 min) foi o protocolo com maior número de plaquetas, seguido por P3 (120g e 473g ambos durante 10 min), P4 (300g e 640g durante 10 min cada), P6 (640g durante 10 min e 640g durante 5 min), P8 (640g durante 5 min e 120g durante 10 min) e P7 (720g e 720g durante 5 min) e diferentes (p<0,05) dos menores valores encontrados em P1 (120g e 240g, ambos por 5 minutos) e P2 (120g e 473g ambos por 5 min). Em relação aos eritrócitos, P8, P7, P6, P5 e P4 apresentaram menores concentrações e maiores valores (p<0,05) foram observados em P3 e P2. Menores quantidades de leucócitos foram observadas em P5, P6, P8 e P7 com o maior valor obtido em P2 (p<0,05). Todos os protocolos (P1 a P8) foram eficientes em concentrar plaquetas sendo o valor mais baixo (3,65±0,79) observado em P1. Em relação aos fatores de crescimento ao se mensurar TGF- 1, os protocolos P1 e P8 evidenciaram valores mais elevados. De acordo com os resultados obtidos os protocolos P5 e P8 apresentaram os melhores resultados para confecção de PRP bovino.(AU)

For standardization of manual technique to obtain autologous platelet-rich plasma (PRP) in cattle with reduced cost (manual method) and good quality (ability to concentrate platelets, high level of growth factors and reduced contamination with leukocytes and erythrocytes), that may be used as a modulating agent of the immune response of cows chronically infected with various diseases, 450ml of whole blood from nine clinically and hematologically healthy cattle were collected in CPDA-1 bags and processed within four hours after collection. The blood was divided in aliquots to evaluate 8 protocols (P) of double centrifugation which varied as the speed and time of centrifugation. Platelet, erythrocytes and leukocytes counts in PRP were performed by manual method in a Neubauer chamber. The highest concentration of platelets was obtained in P5 (400g and 800g both for 10 min), followed by (p>0.05) P3 (120g e 473g ambos durante 10 min), P4 (300g e 640g durante 10 min cada), P6 (640g durante 10 min e 640g durante 5 min), P8 (640g durante 5 min e 120g durante 10 min) and P7 (720g and 720g both for 5 min) and different (p <0.05) than the protocols that had lower rates at P1 (120g to 240g, both for 5 minutes) and P2 (both 120g and 473g for 5 min). As for erythrocytes, P8, P7, P6, P5, P4 showed lower concentrations with higher values (p <0.05) observed in P3 and P2. Lesser values of leukocytes were found in P5, P6, P7 and P8 with the biggest value (p <0.05) obtained in P2. All protocols (P1 to P8) were efficient to concentrate platelets and the lowest value (3.65±0.79) was found in P1. Regarding TGF-ß1, the P1 and P8 protocols demonstrated the highest values. According to results, P5 and P8 protocols showed the best results for production of PRP in bovine.(AU)

Componentes ricos em plaquetas na reparação de afecções tendo-ligamentosas e osteo-articulares em animais: [revisão] / Components rich in platelets used in wound healing tendon, ligaments and osteo-articular diseases of animals: [revision]

O plasma rico em plaquetas e o concentrado de plaquetas são fontes de diversos fatores de crescimento, com grande potencial terapêutico. Uma vez liberados dos grânulos alfa das plaquetas ativadas, esses fatores atuarão no sítio da lesão, estimulando a quimiotaxia, fibroplasia e angiogênese, melhorando assim a reparação tecidual. Embora esses componentes ricos em plaquetas sejam de fácil obtenção e de eficácia comprovada na medicina humana e odontologia, a utilização desses componentes na medicina veterinária é relativamente recente, necessitando ainda de estudos controlados. Neste artigo, os aspectos morfológicos das plaquetas, a ação dos fatores de crescimento e a utilização de componentes ricos em plaquetas na reparação tecidual de estruturas tendo-ligamentosas e osteo-articulares são revisados.

Platelet-rich plasma and platelet concentrates are involved in growing factors. Both have great therapeutic potential. When the alpha-granules are released by the active platelet, they act in the lesion site stimulating the chemotaxis, the fiberplasia and the angiogenesis. They improve the regeneration of the tissue. Although these rich platelet components are easy to obtain and efficiently to prove by medicine and dentistry, their use on vet medicine is recent. So, much more control studies need to be done. This article reviews morphological aspects of platelets, action of growing factors and use of components rich in platelet in wound healing tendons, ligaments and osteo-articular structures.

Evaluation of platelet aggregation in platelet concentrates (PCs): storage implications: erratum / Avaliação da agregação plaquetária em concentrados de plaquetas (PCs): implicações de estocagem: errata

A utilização de hemoderivados constituí-se em uma modalidade terapêutica de fundamental importância no exercício da medicina. Dentre os diversos hemocomponentes que podem ser utilizados, o concentrado de plaquetas (CP) é indicado em situações de distúrbios hemorrágicos. Em estudos anteriores demonstramos que a função plaquetária em doadores de sangue apresenta-se reduzida após fracionamento. No presente trabalho, avaliamos as mudanças bioquímicas e funcionais em CP estocados durante três dias à temperatura de 20 ± 2 ºC. Foram estudados 40 CPs estocados em bolsas de polivinil PL-146 tendo como anticoagulante CPD. O estudo de agregação plaquetária foi avaliado utilizando-se como agonistas colágeno e trombina. Os parâmetros bioquímicos avaliados foram pH, PCO2, pO2 e concentração de lactato. Foi observado um aumento significativo de pH de 7.07 ± 0.04 para 7.36 ± 0.07 (p < 0.01). A concentração de pC02 diminuiu progressivamente de 69.2 ± 7.7 mmHg para 28.8 ± 6.2 mmHg (p<0.001) durante o período de estocagem. Por outro lado, a concentração de pO2 aumentou de 103.4 ± 30.6 mmHg para 152.3 ± 24.6 mmHg (p<0.001) após 48 horas de estocagem. A concentração de lactato aumentou de 17.97 ± 5.2 para 57.21 ± 5.7 mg/dL (p< 0.001). A agregação plaquetária utilizando-se como agonista trombina -0.25U/mL e colágeno-2.0 mg/mL mostrou hipofunção significativa de 61.8 ± 2.7% para 24.8 ± 9.8% e 62.7 ± 5.0% para 33.4 ± 6.2% (p<0.001), respectivamente. Concluímos que a função plaquetária e os parâmetros bioquímicos avaliados alteram-se significativamente quando as plaquetas são mantidas sob condições de armazenamento.